elisa是酶聯(lián)接免疫吸附劑測(cè)定的簡(jiǎn)稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。

 

　　在檢測(cè)時(shí)，受檢標(biāo)本與固相載體表面的抗體反應(yīng)。洗滌后加入酶標(biāo)記的抗體，通過反應(yīng)結(jié)合在固相載體上。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。

 

　　elisa實(shí)驗(yàn)的原理：

　　1、包被：抗原或者抗體能以物理性吸附于固相載體表面，原因是蛋白質(zhì)和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附，吸附之后能保持抗原反應(yīng)等免疫活性；

　　2、標(biāo)記：抗原或者抗體可通過共價(jià)鍵與酶連接成酶結(jié)合物而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫活性和酶的催化特點(diǎn)；

　　3、顯色：酶結(jié)合物與相應(yīng)包被在固相載體的抗原或抗體結(jié)合后，也被固定在固相載體上，加入酶的底物之后可出現(xiàn)顯色反應(yīng)，根據(jù)反應(yīng)的顏色深淺可計(jì)算抗原或者抗體的相對(duì)含量。

 

　　elisa實(shí)驗(yàn)步驟：

　　1、從室溫平衡20分鐘后的鋁箔袋中取出所需酶標(biāo)板孔數(shù)目，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

　　2、標(biāo)準(zhǔn)品和樣本加樣：設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL。樣本孔先加待測(cè)樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL，空白孔不加。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

　　3、加酶：標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔。

　　4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60分鐘。

　　5、配液：將20X濃縮洗滌液用蒸餾水稀釋20倍后備用。

　　6、洗滌：小心揭開封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次。

　　7、顯色：每孔加入底物A、B各50μL，輕輕震蕩混勻后，37℃避光孵育15min。

　　8、終止：每孔加入終止液50μL，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立刻轉(zhuǎn)為黃色。

　　9、測(cè)定：以空白孔調(diào)零，15分鐘內(nèi)在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的吸光度（OD值）。